Есть ли разница между буферами TAE и TBE для электрофореза в агарозном геле?

Электрофорез в агарозном геле — традиционный метод разделения и идентификации нуклеиновых кислот в лабораториях молекулярной биологии. Нуклеиновые кислоты представляют собой амфотерные электролиты с изоэлектрической точкой pH 2–2,5. В обычных буферах для электрофореза (рН около 8,5) молекулы нуклеиновой кислоты заряжены отрицательно. Заряд движется к положительному полюсу электрического поля.

С помощью технологии электрофореза можно разделить молекулы РНК разного размера и конформации и, наблюдая за количеством, размером и формой полос, можно судить о целостности молекул РНК. В этом процессе основной функцией буфера для электрофореза является поддержание pH и придание раствору определенной проводимости. TAE (буфер трис-уксусной кислоты) и TBE (буфер для электрофореза трис-борной кислоты) являются обычно используемыми буферами. В чем разница между ними?

TAE (трис-ацетатный буфер)

Преимущество:

① Для фрагментов ДНК размером более 13 КБ буфер TAE позволяет добиться лучших результатов разделения.

② В буфере TAE сверхспиральное состояние ДНК может лучше сохранять свою истинную относительную молекулярную массу во время электрофореза.

③Подходит для восстановления фрагментов ДНК и последующих реакций ферментативного расщепления и т. д.

недостаток:

Буферная емкость невелика, и буфер TAE может постепенно терять свою буферную способность pH во время длительного электрофореза, что приводит к изменению значения pH.

TBE (буфер для электрофореза трис-борной кислоты)

Преимущество:

① Буферная емкость относительно выше, значение pH можно поддерживать постоянным даже во время длительного электрофореза, и вызвать перегрев резервуара для электрофореза непросто.

② Подходит для электрофоретического разделения более мелких фрагментов, например фрагментов размером менее 1 КБ. Его высокое разрешение позволяет легче различать молекулы разных размеров, тем самым повышая точность экспериментов.

недостаток:

Содержащийся компонент борной кислоты может повлиять на эффективность восстановления РНК и ДНК и последующие эксперименты с ферментативными реакциями.