ПЦР-эксперимент

ВведениеЭлектрофорез нуклеиновых кислот — это фундаментальный метод в молекулярной биологии, используемый для разделения фрагментов ДНК или РНК на основе их размера. Этот метод основан на электрическом поле для перемещения отрицательно заряженных нуклеиновых кислот через гелевую матрицу, как правило, агарозу или полиакриламид. Затем разделенные фрагменты можно визуализировать и документировать с помощью системы гель-документирования, такой как YB-GD1 от Yanbiotech, для точного анализа. Ниже приведен подробный пошаговый протокол для проведения электрофореза нуклеиновых кислот.Требуемые материалы1. Приготовление геля:Агарозный порошок (для электрофореза в агарозном геле)Буфер TAE (трис-ацетат-ЭДТА) или TBE (трис-борат-ЭДТА)Лоток для литья геля и расческаБромистый этидий (ЭБ) или более безопасные альтернативы, такие как SerRed.2. Подготовка образца:Образцы ДНК/РНКЗагрузка красителяЛестница ДНК (стандартный размер)3. Установка для электрофореза:Электрофорезная камераИсточник питанияСистема документирования гелей Yanbiotech YB-GD1 (или УФ-трансиллюминатор для визуализации)Пошаговая процедура1. Приготовление агарозного геля1.1: Подготовьте буфер (обычно 1X TAE или TBE).1.2: Взвесьте необходимое количество агарозы (например, 1% агарозы для стандартного разделения ДНК).1.3: Смешайте агарозу с буфером и нагрейте до полного растворения (в микроволновке в течение 30–60 секунд).1.4: Слегка охладите раствор (~60°C), затем добавьте краситель ДНК (например, EB или SerRed).1.5: Вылейте гель в формочку для литья со вставленной в нее расческой и дайте ему затвердеть (~20–30 мин).2. Загрузка образцов2.1: Осторожно снимите гребенку и поместите гель в камеру для электрофореза.2.2: Заполните камеру достаточным количеством буфера, чтобы покрыть гель.2.3: Смешайте образцы ДНК с загрузочным красителем (для отслеживания миграции).2.4: Загрузите образцы в лунки, включая ДНК-лестницу для определения размера.3. Проведение электрофореза3.1: Подключите электроды (отрицательный к стороне образца, положительный к противоположному концу).3.2: Подайте напряжение (обычно 80–120 В для агарозных гелей).3.3: Продолжайте, пока фронт красителя не пройдет ¾ длины геля (~30–60 мин, в зависимости от размера фрагмента).4. Визуализация и документирование результатов с помощью YB-GD14.1: Отключите питание и осторожно удалите гель.4.2: Поместите гель в систему документирования гелей Yanbiotech YB-GD1 для получения изображений с высоким разрешением.YB-GD1 обеспечивает возбуждение ультрафиолетовым и белым светодиодами, что позволяет визуализировать SerRed и другие распространенные красители нуклеиновых кислот.Высокочувствительная ПЗС-камера обеспечивает четкое и точное обнаружение полос.Сопутствующее программное обеспечение позволяет проводить автоматический анализ полос и оценку размера путем сравнения образцов с ДНК-лестницей.4.3: Сохраните и экспортируйте изображение геля для дальнейшего документирования и публикации.Советы по устранению неполадокРазмазывание: может указывать на деградацию ДНК или слишком большую загрузку образца.Нет полос: проверьте метод окрашивания, условия электрофореза или количество ДНК.Неровные полосы: убедитесь, что гель нанесен равномерно и концентрация буфера правильная.Низкое качество изображения (при использовании YB-GD1): отрегулируйте время экспозиции или настройки фокусировки в программном обеспечении.ЗаключениеЭлектрофорез нуклеиновых кислот — это простой, но мощный метод анализа ДНК и РНК. Тщательно следуя этим шагам и используя систему документирования гелей YB-GD1 от Yanbiotech, исследователи могут добиться высококачественной визуализации, точного определения размеров и профессионального документирования фрагментов нуклеиновых кислот. Этот метод широко используется в клонировании, проверке ПЦР и генетическом дактилоскопировании, что делает его необходимым для лабораторий молекулярной биологии.Почему стоит выбрать YB-GD1 от Yanbiotech?✔ Высокое разрешение изображений для точного обнаружения полос ДНК/РНК✔ Опции УФ и светодиодов для совместимости с несколькими красителями✔ Удобное программное обеспечение для автоматического анализа полос✔ Компактная и эффективная конструкция, идеально подходящая для лабораторных рабочих процессовХотите ли вы получить какие-либо дополнительные изменения или подробности о системе YB-GD1?